引物探针设计(引物探针设计软件)

PCR引物设计方法和原理

1、PCR的技术的主要步骤及PCR引物设计的一般原则分述如下：PCR的技术的主要步骤：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。

2、【答案】：DNA聚合酶链式反应技术简称PCR技术，是一种以模板DNA为基础，在引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶的酶促反应，完成对模板的目的片段的快速扩增的过程，其依赖于3个温度的反复循环。

3、PCR技术原理是：先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链，然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物，即左右引物。

4、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

求助怎么设计mirna引物及探针

1、引物之间的TM相差避免超过2℃ 引物的3’端避免使用 碱基 A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个 外显子 。

2、纯化PCR产物，去除杂质，得到所需的探针片段。优点：PCR扩增法样本处理简单，耗时短，扩增效率高、特异性好、检测灵敏度高。缺点：PCR扩增法对设计引物的要求较高，存在扩增偏爱性的问题，易出现带有某些突变的扩增产物。

3、当引物和探针按照上述原则设计好后，循环的参数也就确定了，当经过起始的变性温度后（根据Tag酶要求设定），反应要经过95℃，15－20秒，60℃60秒，对于一些模板，45秒也足够了。数据在退火时检测。

4、引物之间的TM相差避免超过2℃ 引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。

5、BeaconDesigner80Demo实时荧光定量PCR分子信标（Molecularbeacon）及TaqMan探针设计软件。 NetPrimerJAVA语言写成的免费引物设计软件，用IE打开运行。 TGGE-STARDOS软件，PCR结合梯度凝胶电泳实验引物设计软件。

如何设计荧光定量PCR的引物及TaqMan探针

1、Taqman探针应靠近上游引物，即Taqman探针应靠近与其在同一条链上的上游引物。两者的距离最好是探针的5端离上游引物的3有一个碱基，但也可以重叠，要保证Taqman探针的5端离上游引物的5端至少有4bp。

2、引物设计的实质：一小段单链DNA或RNA，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。

3、目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针（荧光共振能量传递探针）和分子信标Molecular Beacon。

4、在DNA测序和PCR中最好用5末端稳定（GC含量多），而3端不稳定（AT含量多）的引物，这种引物的结构可以有效地消除假引发反应；1引物和产物之间的Tm值相差别太大，20摄氏度范围内最好。